抽丝剥茧 核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”,而检测流程中的每一个环节都是精细活,容不得半点马虎。在操作中,实验员面对眼前的样本,需要“一个一个揭开盖子加样和核酸提取”,这无疑是与病毒的正面交锋。 那么,P3实验室的实验员是如何与病毒“过招”的?据介绍,实验室内的检测流程可分为5个步骤:样本进入“传递窗”——灭活处理——开盖加样和核心提取——扩增反应判断结果——高压灭菌。 第一步是样本进入实验室。采集的检测样本在进入P3实验室前,得先进入一个特殊的窗口——“传递窗”,也叫作空气锁。它有不能同时打开的双重门,保证传递样本时带进去的空气被隔离在双重门中,使实验室外的环境不受污染。样本将在这里开启它在实验室中短暂的一生。 第二步是检测前的灭活处理。样本将在水浴箱经半小时56℃高温灭活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力。这会让检测时相对安全,但病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。 第三步是检测的核心环节——开盖加样和核酸提取。 该院检验医学部副主任技师胡亮杉是进入P3负压实验室完成设备调试、程序设定、试剂试用等前期准备工作的第一人。“在标本处理间,实验员拿到灭活后的样本时,第一个动作就是振荡,尽量让拭子上的病毒洗脱在培养基溶液中,再静置5分钟沉淀。接下来是开盖加样,必须人工操作,且需要两个人高度配合才能完成。一人拧开样本罐盖子,另一人拿着微量移液器在样本罐中吸取微量溶液,放到另一个提取管里,再拧上管盖。”她介绍,就这样,400多份样本要打开瓶盖吸取转移400多次,每一次都是实验员与病毒面对面的“开撕”。 “在开盖转移过程中,病毒非常容易暴露在实验室空气中。”胡亮杉说,“开盖加样时,拿着微量移液器的手往往因为戴着双重手套,显得有些笨拙,可又不得不小心翼翼,再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔,所有动作都显得缓慢,手也因为动作的缓慢不时颤抖,经常是左手扶着右手完成加样的。” 人工核酸提取的步骤更为复杂,考验着实验员的耐心与谨慎。“核酸提取可以使用仪器辅助,但由于比对需要,往往要加以人工操作,需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。其中,需要打开管盖的操作就达7次以上,完成一例人工核酸提取要50分钟左右。”胡亮杉说。 第四步是判断结果。提取的核酸送到核酸检测室内,就要上仪器了。实验员将提取的核酸加入到扩增试剂中,通过荧光PCR仪进行RT-PCR反应,用时约110分钟,就可分析判断结果为阴性或阳性了。 最后是污染物的高压灭菌处理。实验过程产生的污染物通过高压灭菌后,按普通医疗垃圾处理。 安全保障 再来看看工作人员是如何工作的。 首先,在清洁区内穿戴中级防护服——通过缓冲间进入实验室内负压工作间,在这里处理标本,核酸提取及检测——完毕后进行空间、表面消毒,按顺序脱下防护服,通过淋浴间更衣后,回到清洁区。这些步骤一个都不能少。 核酸检测的宗旨是高效、有序和安全。其中,工作人员的安全是重中之重。为确保安全,该院采取了多种措施。第一,人员筛选,在下达抗疫动员令后,许多人踊跃报名,经过重重筛选,留下来的都是身体健康、训练有素的年轻“老手”;第二,岗前安全培训,严格按要求穿戴防护服,熟悉操作流程;第三,严格执行消毒灭菌制度,该院P3实验室管理员闫修魁全程负责每天的消毒工作;第四,建立感控督导员制度,及时发现负压区工作人员的不适或操作不当之处,确保人员身心安全。 到目前为止,该院P3实验室未出现过生物安全问题。
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